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微液滴數字PCR平台


獨特的産品優勢
1加樣體(tǐ)積可調   加樣體(tǐ)積在20-50μL内可調,更多加樣量,意味着更高靈敏度
2樣品數量靈活   每張芯片可處理1 -8個樣本,靈活可調,節省試劑耗材
3微滴數多       30μL樣本可制備約5萬個均一(yī)穩定的納升級液滴,線性範圍廣,爲0-30萬拷貝/樣本。
4微滴無需轉移      全封閉體(tǐ)系,操作簡單,微滴生(shēng)成後無需轉移,減少微滴損失
5封閉檢測          檢測時機器封閉運行,确保PCR産物(wù)不暴露在空氣中(zhōng),防止氣溶膠污染和樣本損失,預防假陽性
6單獨加樣           每個樣本獨立加樣控制,避免樣本間交叉污染
7信噪比高       相比成像方法,基于PMT進行信号檢測,容易判讀,結果準确


檢測流程

液滴制備(5分(fēn)鍾)+ PCR擴增(1.5小(xiǎo)時)+ 檢測分(fēn)析(25分(fēn)鍾)= 2小(xiǎo)時
 
數字PCR十大(dà)應用
1基因表達差異研究  
數字PCR可以提供比實時熒光定量PCR更精确的基因差異表達研究,尤其對于那些靶基因表達差異微小(xiǎo)的情況,如:mRNA、microRNA、 IncRNAs等的表達分(fēn)析;等位基因的不平衡表達;單細胞基因表達分(fēn)析;外(wài)泌體(tǐ)核酸分(fēn)子定量分(fēn)析等
2低豐度DNA模闆分(fēn)子的精确定量
由于絕大(dà)部分(fēn)微液滴中(zhōng)隻含單個或不含模闆分(fēn)子,使得低豐度DNA模闆分(fēn)子的擴增不受高豐度模闆分(fēn)子擴增的競争抑制,與此同時,樣本中(zhōng)可能存在的抑制劑也在分(fēn)配到微液滴的過程中(zhōng)進行了相對稀釋,作用于單個微液滴内模闆擴增的抑制劑數量大(dà)幅降低,從而提高PCR擴增對抑制劑的耐受程度,因此可應用于諸多臨樣本(如血液、尿液、糞便、痰液、胸腹水、 腦脊液等)中(zhōng)痕量核酸标記物(wù)的檢測。一(yī)般而言, 定量PCR的檢測靈敏度約在1%, NGS的靈敏度可達到1%,而數字ECR的檢測下(xià)限可輕松實現0.01%
3拷貝數變異(CNV)研究
數字PCR直接讀取陽性信号,通過泊松分(fēn)布校正得到目标基因的絕對拷貝數,爲拷貝數變異的研究提供了絕對的檢測精度。采用數字PCR能夠有效對二代測序(NGS)和微陣列比較基因組雜(zá)交(aCGH)等實驗結果進行驗證,并具有 檢測周期短、成本低、樣本通量高等特點
4甲基化含量鑒定
傳統的亞硫酸氫鹽處理後的克隆測序法、抗體(tǐ)檢測法、定量PCR檢測法等受限于方法學的問題,不能獲得甲基化程度的精确定量,而數字PCR 系統通過對樣本的微液滴處理及目标分(fēn)子的絕對拷貝數定量,爲甲基化程度的精确定量檢測提供了一(yī)種可靠的技術
5二代測序輔助建庫
目前靶向測序建庫方法包括擴增子方法,在均相溶液中(zhōng),當擴增引物(wù)增加時,由于擴增引物(wù)之間的相互作用,從而影響擴增的效率;如果将其分(fēn)散到大(dà)量微液滴中(zhōng)擴增,将可大(dà)大(dà)降低引物(wù)間相互作用,提高擴增效率。同時還可以實現對于少量模闆的有效擴增,得到更多的有效測序數據
6 CRISPR-Cas9基因編輯結果驗證
CRISPR-Cas9技術的發明,是基因編輯技術的 一(yī)大(dà)突破,但如何驗證實驗是否成功,仍需要 高靈敏度的檢測方法,數字PCR技術可以滿足這一(yī)需求。Broad研究所張鋒團隊發明了以 CRISPR爲基礎的SHERLOCK技術可以對核酸 進行高靈敏度的定性檢測,但精确定量評估時 仍采取了數字PCR進行确認
7無創産前篩查
唐氏綜合征、地中(zhōng)海貧血或胎兒遺傳性耳聾基因檢測等,目前無創檢測标本來源主要爲孕婦 血液,檢測胎兒DNA會受到母體(tǐ)DNA的幹擾, 依靠數字PCR可提高檢測準确性。對比NGS, 數字PCR技術可以提高工(gōng)作效率、降低檢測成本
8微生(shēng)物(wù)(病毒、細菌等)的檢測
疾病預防控制中(zhōng)心、出入境檢驗檢疫局系統的實驗室可以将基于TaqMan探針法的定量PCR體(tǐ)系無縫地轉移到數字PCR上,從而滿足該類實驗室對于檢測結果的要求:靈敏度更高、重複性更好、無需依賴标準曲線的絕對定量結果
9腫瘤治療的伴随診斷
常用體(tǐ)液來源(如血液,胸腹水,唾液及尿液等) 的待檢标本中(zhōng)的DNA,有正常脫落體(tǐ)細胞和病變脫落細胞兩種來源,前者的量遠大(dà)于後者。通過微液滴處理能在每個微液滴中(zhōng)有效減少正常體(tǐ)細胞DNA的幹擾,實現腫瘤标記物(wù)的有效檢測,如 EGFR, ALK, ROS1, KRAS、BRAF 等 基因的突變檢測、乳腺癌/胃癌的HER2基因擴增檢測等,應用于腫瘤精準醫學的伴随診斷
10移植排斥監控
接受肝髒移植的患者,目前用于檢測器官排斥反應的常規方法是監測患者血液中(zhōng)的生(shēng)化指标異常,一(yī)般情況下(xià)超過50%的移植器官功能已經喪失。新的研究表明通過對七例術後移植患 者的移植物(wù)遊離(lí)DNA進行數字PCR檢測,更早發現了兩例發生(shēng)排斥反應的患者,取得了令人 滿意的結果






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